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Número 19 Vol. 1 (2018)
ESTUDIO COMPARATIVO DE LA ACTIVIDAD PSICOACTIVA
DE PASSIFLORAS DE LA PROVINCIA DE CHIMBORAZO
Comparative Study of The Psychoactive Activity of Passioras
from The Province of Chimborazo
1
Vinueza Diego,
1
Pilco Gisela*,
1
Acosta Karen,
2
Tierra Patricia,
2
Noboa Patricio,
1
Abdo Susana
1
Facultad de Ciencias, Escuela Superior Politécnica de Chimborazo,
2
Facultad de Recursos Naturales, Escuela Superior Politécnica de Chimborazo
Panamericana Sur km 1½, Riobamba – Ecuador
gisel_apb@yahoo.es
R
esumen
A
bstract
La variedad climática y la ubicación territorial del Ecuador favorece la diversidad biológica en el
país. Sin embargo, debido a la presencia de gran número de ora y fauna por kilómetro cuadrado, la
mayor parte no se encuentra estudiada, y a pesar de no contar con argumento cientíco para el uso
de algunas especies vegetales, la población utiliza muchas de éstas para diferentes patologías, por
lo que se realizó el estudio farmacológico de seis especies del género Passiora de la provincia de
Chimborazo – Ecuador, empleadas tradicionalmente para tratar el nerviosismo. Para la identicación
se llevó a cabo un perl de cromatografía en capa na de cada especie, de los que se pudieron deter-
minar cantidades considerables de moléculas con agrupamiento de tipo avónico y cuanticación de
los avonoides totales. De las especies estudiadas P. manicata se destacó por su elevado contenido
de avonoides totales usando el método de cloruro de aluminio para derivatizar los compuestos de
interés y poder evaluarlos mediante espectrofotometría UV-visible. Mientras que para la actividad
farmacológica se llevó a cabo in vivo mediante el modelo de laberinto en cruz elevado. De los re-
sultados obtenidos se ha logrado determinar que al menos dos de las seis especies tienen actividad
ansiolítica signicativa a las dosis de 25 y 50 mg/kg de extracto hidroalcohólico, siendo P. mixta y
P. edulis las especies vegetales que en su composición presentarían constituyentes bioactivos para
tal efecto.
Climate variability and territorial location of Ecuador promotes biodiversity in the country.
However, due to the presence of a big number of ora and fauna per square kilometer, most of it is
not studied and despite not having a scientic argument for the use of some species, the population
uses many of these for different pathologies, for this reason, a pharmacological study of six species
of the genus Passiora from the province of Chimborazo – Ecuador was carried out, traditionally
used to treat nervousness. For identication, a thin layer chromatography prole of each species was
carried out, of which it was possible to determine considerable quantities of molecules with grou-
ping of avonoid type and quantication of the total avonoids. Of all the species P. manicata was
noted for its high content of total avonoids using aluminum chloride method for derivatizing the
compounds of interest and to evaluate UV-visible spectrophotometry. While for the pharmacological
activity it was carried out in vivo by the elevated plus-maze test. From the results obtained it has been
Palabras claves: Passiora, ansiolítico, avonoides, laberinto en cruz elevado.
Revista Científica
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determined that at least two of the six species have signicant anxiolytic activity at doses of 25 and
50 mg/kg of hydroalcoholic extract. Species like P. edulis and P. mixta have bioactive constituents
for this purpose.
Keywords: Passiora, anxiolytic, avonoids, elevated cross maze.
INTRODUCCIÓN
La diversidad ecosistémica del Ecua-
dor se debe principalmente a la variedad
climática y a la topografía particular del
territorio, estos factores han permitido
la presencia de 46 formaciones vegeta-
les naturales (1). Por lo anteriormente
indicado, existe un número elevado de
especies vegetales y animales por kiló-
metro cuadrado en todas las regiones
del Ecuador (sierra, costa, amazonía y la
zona insular), sin embargo con tal diver-
sidad solo pocas han sido estudiadas (2).
La familia Passioraceae comprende
17 géneros y 660 especies (3), 4 géne-
ros han sido identicados en América
(Ancistrothyrsus, Dilkea, Mitostemma y
Passiora) y aproximadamente 500 es-
pecies, la mayoría del género Passio-
ra (4). Las ores, hojas y frutos de los
integrantes de la familia Passioraceae
son llamativos y peculiares por lo que
son utilizados con nes ornamentales
y comestibles (5), el nombre Passiora
fue dado por los conquistadores espa-
ñoles que describieron a las ores como
símbolos de la “Pasión de Cristo”(6),
muchas especies han sido usadas en la
medicina tradicional, entre ellas Passi-
ora incarnata L. Passiora foetida y
Passiora edulis (7). De las investiga-
ciones más prometedoras P. edulis pre-
cede la lista por poseer en sus semillas
compuestos como piceatanol capaz de
inhibir la melanogénesis y promover la
síntesis de colágeno.(8)
La presencia de una variedad de to-
constituyentes en el género Passiora ha
sido descrita. Sin embargo, los reportes
sobre investigación farmacológica desa-
rrollada, son limitados en Ecuador, sin
embargo los estudios que existen se basan en la actividad
depresora sobre el Sistema Nervioso Central (SNC) de
diversas especies de Passiora (9). Por otra parte, no se
han llevado a cabo estudios sobre los efectos ansiolíticos
de las especies nativas de Passiora en Ecuador. Los es-
tudios farmacológicos previos en Sudamérica del géne-
ro Passiora han sido desarrollados en Brasil tanto para
Passiora alata como Passiora edulis en los que han
sido descritos como depresores del SNC en ratones (10).
De igual manera, en reportes subsiguientes en los que se
realiza la correcta identicación de Passiora incarnata
y Passiora edulis en India, se establece que el extracto
metanólico de P. incarnata muestra actividad ansiolítica
signicativa, mientras que P. edulis estaba desprovista
de cualquier actividad signicativa (11). Otras especies
como Passiora caerulea con un contenido apreciable de
crisina (monoavonoide) ha demostrado actividad ansio-
lítica a una dosis de 1 mg/kg en ratones; en comparación
con diazepam a 6 mg/kg para los efectos miorrelajantes.
Por otra parte, se han reportado efectos no especícos
depresores del SNC en ratones, ratas y voluntarios huma-
nos sanos del extracto acuoso de Passiora edulis. En el
caso de Passiora incarnata también conocida como or
de la pasión es la especie del género que se ha utilizado
ampliamente debido a su efecto ansiolítico y sedante en
todo el mundo desde tiempos inmemoriales. Desde 1974
una gran cantidad de diferentes compuestos han sido ais-
lados de Passiora incarnata como maltol, etil maltol y
un derivado de γ-benzopirona; de ellos el etil maltol se
ha destacado por sus propiedades anticonvulsivas. Pos-
teriormente, el aislamiento de una benzoavona tri-susti-
tuida como el principal tocomponente bioactivo marcó
un antes y después en el caso de la actividad sobre el
SNC de Passiora incarnata (9). El pericarpio de Pas-
siora quadrangularis igualmente ha sido estudiado con
el n de aclarar la implicación de la vía GABAérgica en
la actividad sedante de apigenina, el avonoide principal
de esta especie de Passiora. Al nal de este estudio, el
efecto sedante de apigenina fue bloqueado por el trata-
miento previo con el agonista inverso de las benzodiaze-
pinas umazenilo a la dosis de 1 mg/kg, lo que sugiere
una interacción del compuesto apigenina con los recep-
Fecha de recepción: 01-dic-2017
Fecha de aceptación: 21-may-2018
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tores de tipo GABA A (12). El objetivo de investigación
fue la evaluación de la actividad ansiolítica de seis espe-
cies de Passiora, algunas de ellas nativas de Ecuador,
usando el modelo animal ratón Mus musculus y la prueba
del laberinto en cruz elevado, como una primera aproxi-
mación a posibles investigaciones y aplicaciones de las
mismas en el futuro.
MATERIALES Y MÉTODOS
a. Material vegetal
Las hojas de P. manicata, P. tripartita, P. edulis, P. qua-
drangularis, P. ligularis, P. mixta y P. incarnata se reco-
lectaron en los alrededores de las ciudades de Riobamba,
Pallatanga y Bucay, provincia de Chimborazo, Ecuador,
en septiembre de 2014.
Los extractos totales fueron preparados tomando como
material de partida las hojas de cada una de las especies
vegetales por separado, que luego de su acondiciona-
miento apropiado, se extrajeron mediante maceración y
sonicación usando como solvente extractivo una mezcla
hidroalcohólica (CH
3
CH
2
OH:H
2
O, 85:15); para poste-
riormente, concentrar los extractos obtenidos a una tem-
peratura no superior a los 50°C y nalmente liolizarlos.
b. Identicación y cuanticación
Se realizó una cromatografía en capa delgada usando pla-
cas de sílica gel 60 con indicador de uorescencia de 254
nm, una fase móvil constituida por acetato de etilo, ácido
fórmico, ácido acético, agua (100:11:11:26) y como re-
activo revelador una solución alcohólica de cloruro de
aluminio en primera instancia y posteriormente poli-eti-
lenglicol 400 como mejorador de la uorescencia (13).
Mientras que la cuanticación de avonoides totales pre-
sentes en los extractos liolizados fue realizada median-
te la derivatización de los mismos utilizando Cloruro de
Aluminio (14). Los avonoides totales fueron evaluados
mediante un ensayo colorimétrico desarrollado por Zhi-
shen y col. (1999). Una alícuota de 1 mL de solución de
muestra o estándar de quercetina diluidas apropiadamen-
te (20, 40, 60, 80 and 100 mg/L) fue añadida a un matraz
aforado de 10 mL conteniendo 4 mL de H2O. A tiempo
cero, 0,3 mL de NaNO
2
(5%, w/w) fue añadido al matraz.
Después de 5 minutos, 0,3 mL de AlCl
3
(10% w/w) fue
adicionado. Después de 6 minutos, 2 mL de NaOH (1M)
fue añadido a la mezcla. Inmediatamente, el volumen del
frasco en que se produce la reacción fue diluido con la
adición de 2,4 mL de H
2
O y mezclado vigorosamente.
La absorbancia de la mezcla, caracteri-
zada por un color rosa, fue determinada
a 510 nm usando agua como blanco. La
cantidad de avonoides totales fue ex-
presada como gramos de avonoides to-
tales equivalentes a quercetina por cada
100 gramos de extracto liolizado. Para
la quercetina, la curva de calibración de
absorbancia en función de la concentra-
ción fue descrita mediante la ecuación
A = 0,001 C + 0,0015.
c. Ensayo Biológico
Ratones hembra de experimentación
Mus musculus de la cepa BALB/c (3-4
meses de edad), con pesos que oscilaban
entre 25-35 g fueron usados para la eva-
luación de comportamiento. Los anima-
les fueron mantenidos en un ciclo de luz
y oscuridad de 12 h (luz a las 07h00 am)
a una temperatura ambiental constante
de 23±2 °C. Los animales fueron alber-
gados en grupos de 5 individuos por caja
(30 cm x 37 cm x 16 cm) con alimen-
to y agua ad libitum, excepto durante el
experimento. Todos los animales fueron
adaptados a las condiciones del labora-
torio por al menos una semana previa
al estudio de evaluación del comporta-
miento.
El vehículo (propilenglicol 15% v/v),
clonazepam (0,5 mg/kg) disuelto en el
vehículo, los extractos hidroalcohólicos
liolizados de P. edulis, P. tripartita, P.
mixta, P. quadrangularis, P. manicata, P.
ligularis (25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/
kg, 200 mg/kg y 300 mg/kg) disueltos en
el vehículo, el vehículo, el fármaco y los
extractos fueron administrados por vía
oral 30 minutos antes del experimento.
El laberinto en cruz elevado o EPM por
sus siglas en inglés se compone de dos
brazos abiertos perpendiculares (30cm x
5cm) y dos brazos cerrados perpendicu-
lares (30cm x 5cm x 25cm). Los brazos
abiertos y cerrados se conectan por una
plataforma central (5cm × 5cm). El labe-
rinto se encuentra a 50 cm por encima del
suelo. Una hora después de los tratamien-
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tos orales, el animal se coloca en el centro
del laberinto con su nariz en la dirección
de uno de los brazos cerrados. El ratón
se observa durante 5 minutos, y el pará-
metro controlado es el tiempo de perma-
nencia del animal en los brazos abiertos y
cerrados. Los compuestos ansiolíticos re-
ducen la aversión natural del animal para
huir hacia los brazos cerrados y promue-
ven la exploración de los brazos abiertos.
El aparato debe limpiarse cuidadosamen-
te con una solución de etanol al 10% des-
pués de cada prueba (15)
d. Análisis de datos
Los datos del estudio farmacológico
fueron analizados mediante un ANOVA
de un factor, seguido por el test de Dun-
nett en caso de encontrarse diferencias
signicativas p<0,05.
RESULTADOS
a. Material Vegetal
El material vegetal y los extractos ob-
tenidos presentaron características físi-
co-químicas y organolépticas propias de
la especie.
b. Identicación y cuanticación
La evaluación del contenido de avo-
noides demuestra que el extracto hidro-
alcohólico de Passiora manicata posee
el contenido más abundante de avonoi-
des totales. Tabla 1. Reportes anteriores
sobre la riqueza en estos componentes
de P. edulis 4.60% son aproximados al
obtenido en este estudio (10).
Se han determinado cantidades impor-
tantes de compuestos avónicos en las
demás especies del género Passiora en
estudio, siendo objeto de interés por la
magnitud en concentración que presen-
tan de estos componentes P. mixta, P.
ligularis y P. tripartita.
La composición en avonoides de los
extractos de P. mixta y P. tripartita en
función de los resultados obtenidos en el perl croma-
tográco revelan una composición similar ( Figura 1), a
diferencia del P. tripartita debido a la intensidad de las
manchas se podría esperar una concentración algo su-
perior; sin embargo, no es así, aunque la uorescencia
que exhiben sus compuestos es pronunciada, esto podría
deberse a la longitud de onda a la que se realiza la cuan-
ticación.
P. ligularis y P. manicata presentaron un compuesto en
común que no se pudo determinar, sin embargo, muestra
un valor de Rf de aproximadamente 0,9. Asimismo, P. ma-
nicata exhibió un compuesto en común con P. mixta y P.
tripartita con un Rf alrededor de 0,6 que podría tratarse de
orientina (13). P. ligularis presentó apenas un par de com-
puestos que no poseen mayor uorescencia a la luz UV.
Especie
Contenido de avonoides totales expresados
como quercetina en gramos por 100 gramos
de extracto hidroalcohólico liolizado, %
Passiora quadrangularis 8,16±0,42
Passiora manicata 58,33±2,22
Passiora edulis 7,74±0,21
Passiora ligularis 30,18±1,38
Passiora mixta 37,73±0,45
Passiora tripartita 14,51±0,42
Tabla 1. Contenido de flavonoides totales expresados como quercetina
en gramos por 100 gramos de extracto hidroalcohólico
Figura 1. Cromatografía en capa fina de soluciones preparadas a una
concentración de 200 ppm de los extractos hidroalcohólicos liofilizados
de: 1. P. edulis, 2. P. quadrangularis, 3. P. mixta, 4. P. ligularis, 5. P. manica-
ta, 6. P.tripartita
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c. Ensayo biológico
Los resultados están descritos en la Tabla 2. Todos los gru-
pos evaluados fueron comparados con el vehículo. En los
casos de P. quadrangularis, P. manicata y P. ligularis no
existe diferencia entre los grupos tratados y el vehículo.
Clonazepam (0,5 mg/kg) fue utilizado como fármaco
estándar ansiolítico. El clonazepam administrado a los
sujetos de experimentación denota un incremento en el
tiempo de permanencia en los brazos abiertos del dispo-
sitivo utilizado en el ensayo (Laberinto en Cruz elevado)
p<0,05.
d. Análisis estadístico
Los animales tratados con P. mixta (25 y 50 mg/kg) y P:
edulis (25 y 50 mg/kg) exhibieron un incremento en el
tiempo de permanencia en los brazos abiertos del dispo-
sitivo p<0,05.
DISCUSIÓN
El modelo de laberinto en cruz elevado es uno de los más
populares ensayos preclínicos para evaluar agentes an-
siolíticos (16). Autores como Pellow en 1985, sugirieron
que la variable más importante para detectar efectos an-
siolíticos es el incremento de permanencia en los brazos
abiertos de EPM (10). Tanto P. edulis como P. mixta, a do-
sis de 25 mg/kg y 50 mg/kg exhiben efectos ansiolíticos
de acuerdo con el modelo de laberinto en cruz elevado.
Sin embargo, al igual que en trabajos anteriores P. edulis
demuestra un incremento en la actividad
locomotora, lo cual se asocia de manera
general a un efecto sedante menor con
respecto al Clonazepam. De los estudios
disponibles, el extracto acuoso de hojas
de Byrsocarpus coccineus a dosis de
50 y 100 mg/kg presentó actividad an-
siolítica in vivo, mostrando efecto más
pronunciado a dosis de 100mg/kg(17).
Mientras que el efecto ansiolítico de ex-
tractos hidroalcohólicos de P. alata a do-
sis de 100 y 150 mg/kg y P.edulis a dosis
de 50, 100 y 150 mg/kg mostraron efec-
tos ansiolíticos, sin embargo, P. edulis a
dosis de 50 y 100 mg/kg incrementaron
la actividad locomotora sugiriendo un
menor efecto sedativo en comparación
con el diazepam (10). En tanto, Passi-
ora incarnata y Passiora edulis se es-
tableció que el extracto metanólico de P.
incarnata muestra una actividad ansiolí-
tica signicativa a una dosis de 125 mg
/ kg por vía oral, mientras que P. edulis
estaba desprovista de cualquier activi-
dad signicativa (11).
Las especies vegetales poseen diversas
actividades biológicas entre ellas mejo-
rar las funciones cerebrales e inuir en
el sistema nervioso central (18), lo que
se atribuye a la presencia de metabolitos
secundarios que actúan frecuentemente
como agonistas o antagonistas de neuro-
transmisores(19), o debido a que forman
análogos estructurales de hormonas en-
dógenas (20). En la literatura disponible
se asocia a los avonoides con la activi-
Tiempo de permanencia brazos abiertos (minutos)
Especie
Propilenglicol
15%, V/V
Clonazepam
3 mg/kg
25 mg/kg 50 mg/kg 100 mg/kg 200 mg/kg 300 mg/kg
P. edulis
1,38±0,15 4,94±0,08 2,03±0,87 1,59±0,36 1,28±0,53 1,08±0,17 1,01±0,45
P. ligularis
1,75±0,68 4,76±0,33 0,20±0,10 0,08±0,02 0,18±0,06 0,11±0,05 0,30±0,08
P. quadrangularis
1,34±1,63 2,47±2,42 0,44±0,30 0,30±0,20 0,57±0,44 0,13±0,13 0,35±0,44
P. manicata
0,89±0,74 1,86±1,91 0,27±0,35 0,38±0,28 0,37±0,40 0,20±0,23 0,06±0,05
P. tripartita
0,42±0,25 4,88±0,24 0,14±0,15 0,23±0,31 0,20±0,25 0,37±0,33 0,47±0,32
P. mixta
0,22±0,06 4,86±0,22 1,95±0,29 2,03±0,34 0,33±0,13 0,18±0,08 0,85±1,6
Los resultados son el promedio±SD de al menos 5 repeticiones.
Tabla 2. Resultados de la prueba de laberinto elevado en cruz para 6 especies de Passiflora.
En P. edulis y P. quadrangularis se observaron igualmen-
te un par de compuestos comunes con valores de Rf de
0,5 y 0,7 aproximadamente; que podrían asociarse con
derivados de apigenina y/o luteolina (13).
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Vinueza, Pilco, Acosta, Tierra, Noboa, Abdo
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dad ansiolítica (9)(10)(12). Compuestos
como crisina son considerados como po-
tenciales ligandos centrales del receptor
de benzodiacepina aislado de Passiora
coerulea, (21)
En cuanto a los resultados de los com-
ponentes toquímicos de las especies
que han denotado actividad ansiolítica,
el extracto hidroalcohólico de P. mixta
posee casi cinco veces más contenido
de avonoides totales expresados como
quercetina que su correspondiente de P.
edulis. De la misma forma se señala que
el extracto hidroalcoholico de hojas de
P. edulis presentó casi el doble del con-
tenido de avonoides que P.alata.(10)
Sin embargo, no se ha encontrado una
correlación entre el contenido de avo-
noides y la actividad ansiolítica. Cabe
recalcar, que es importante considerar la
diferente composición de avonoides en
los extractos.
En el caso de P. manicata en la que se
han reportado los compuestos vitexina,
isovitexina e isoorientina (22), los dos
primeros compuestos se han probado
puros y no presentan actividad ansio-
lítica, entre tanto; se ha descrito que
isoorientina posee un muy leve efecto
ansiolítico (10); en esta investigación se ha corroborado
que el extracto hidroalcohólico de P. manicata no posee
actividad ansiolítica signicativa en el modelo de prueba.
CONCLUSIONES
De las seis especies de Passiora, respecto a la actividad
ansiolítica la que mejor resultados presentó fue P. edu-
lis mientras que la de menor efecto fue P. manicata, sin
embargo P. manicata exhibió un porcentaje elevado de
avonoides totales por lo que se podría estudiar por sus
efectos antioxidantes.
Se puede establecer que la presencia de otros compuestos
presentes en los extractos de P. mixta y P. edulis serían
responsables de su efecto farmacológico. Sin embargo,
posteriores estudios serían necesarios para evaluar el po-
tencial de los compuestos de especies de Passiora en
Ecuador con nes ansiolíticos.
AGRADECIMIENTOS
Se agradece a la Escuela Superior Politécnica de Chim-
borazo a la Facultad de Ciencias por brindar las facilida-
des para el desarrollo de esta investigación.
CONFLICTO DE INTERESES
Los autores declaran no tener ningún conicto de inte-
reses
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